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灭菌技术培训手册

次氯酸钠消毒液

发生器知识与应用

臭氧应用～臭氧气体杀菌作用的实验效果

关键词 臭氧空气消毒表面消毒

臭氧为广谱高效杀菌剂。国外最早用于水的消毒，我国近年对其气体消毒的应用日渐广泛。为确证其杀菌作用，在实验室内进行了有关研究，现将结果报告于下。

方法

试验分两部分，一为表面消毒试验，一为空气消毒试验。前者在装有臭氧发生器的 JR-90-XB型电子盒（臭氧发生器功率为6W）中进行，后者则以JR-88-M型臭氧发生器（功率为15W）在室内进行。

• 臭氧量的测定

将直径为 3mm塑料管插入臭氧熏蒸消毒空间。当到达规定的各工作时间，用注射器分别抽取50ml气体样本，注入吸收液内。吸收液装于吸收管内，为含1%碘化钾的0.1M磷酸盐冲液（PH6.8）。在30分钟内以721型分光光度计（波长未352mm）测定样本的吸光度，与标准曲线对比，计算出臭氧浓度 [3] 。

• 表面杀菌试验

取无菌平皿，各滴加菌液 0.5ml，在皿底涂布均匀，置37℃温箱干燥10分钟备用。每个平皿滴加一种菌。所用菌液有：金黄色葡萄球菌（ATCC638）、大肠杆菌（ATCC25922）、伤寒杆菌（H901）、痢疾杆菌（杭州市站）与枯草杆菌黑色变种（ATCC9372）芽孢。另取无菌平皿按上法滴加乙型肝炎阳性病人血清并使干燥。每平皿滴加血清量为0.1ml。

将染菌（或 HBsAg）平皿置JR-90-XB型电子保鲜盒内进行消毒处理。到规定作用时间后取出平皿，滴加无菌生理盐水1ml，使菌液重新悬浮，作琼脂倾注培养，并计数每个平皿菌落数。HBsAg样本则以RPHA法测定其残留滴度。

• 空气消毒试验

在关闭门窗的房间内，用臭氧发生器进行消毒。消毒前后进行空气中自然菌采样以测定消毒效果。空气采样用平板沉降法，即在室内5个不同位置各放1个不加盖琼脂平板，采样15分钟。样本置37℃温箱培养24小时观察菌落生长数。

结果

• 消毒时臭氧的浓度

在表面消毒与空气消毒时，分别采样测定了在保鲜盒（容积 88L）与试验房间内（面积为14m 2 ,容积为42m 3 ）内臭氧的浓度。保鲜盒内装有JR-90-XB型臭氧发生器一个，试验房间内放置JR-88-M臭氧发生器一台。结果表明，空气中臭氧的浓度随臭氧发生器工作时间的延长而增加（表1）。保鲜盒中浓度之所以偏低，一方面因发生器的功率较小，一方面其密闭性较差。

表 1 消毒时空气总臭氧浓度测定结果

Table 1 The ozone concentration in air during disinfection

臭氧发生器工作时间 Working time of ozone generator(min)	空气中臭氧浓度 Concentration of ozone in air (mg/L)
臭氧发生器工作时间 Working time of ozone generator(min)	表面消毒 Surface disinfection	空气消毒 Air disinfection
10	0.015	0.139
20	0.025	0.300
30	0.027	0.357
60	0.028	0.425

• 表面杀菌作用

在保鲜盒内观察了 3 种作用时间的杀菌效果，每种时间放置了 2 个染菌平皿。试验时，室温为 25 ℃，相对湿度为 85% 。结果表明，臭氧对 4 种细菌繁殖体的杀灭作用相似，作用 60 分钟可达 99.9% 以上，对细菌芽孢的杀灭作用较差（表 2 ），对 HBsAg 的破坏作用，作用 60 分钟仅减少 75.0% （表 3 ）。

表 2 JR-90-XB 型电子保鲜盒臭氧杀菌作用

Table 2 The bactericidal efficacy of ozone produced by ozone disinfection box (JR-90-XB)

细菌 Bacteria	作用不同时间（ min ）的杀灭率 Killing rate after exposure for different time(min)(%)
细菌 Bacteria	20	30	60
金黄色葡萄球菌 Staphylococcus aureus	99.51（31/6370）	99.86（12/6100）	99.91（5/5620）
大肠杆菌 Escherichia coli	99.06（70/7450）	99.76(16/6840）	99.95（3/6080）
伤寒杆菌 Salmonella typhi	99.65（20/5760）	99.76（12/5160）	99.93（3/4680）
福氏痢疾杆菌 Shigella flexneri	99.62（30/8100）	99.86（10/7380）	99.97（2/6840）
枯草杆菌黑色变种芽孢 Spore of Bacillus subtilis var.niger	94.78（240/4600）	94.909（230/4510）	96.10（175/4490）

注：括弧内的分母为消毒前每个平皿所含细菌数（ cfu ），分子为消毒后每个平皿所含细菌数（ cfu ） .

Note ： The denominators of the figures in parentheses are the bacterial counts (cfu / dish) before disinfection ， the numerators are those (cfu / dish)after disinfection.

表 3 JR-90-XB 型电子保鲜盒中臭氧对 HBsAg 的破坏作用

Table 3 The destructive effect of ozone produced by ozone disinfection box

(JR-90-XB)on HBsAg

臭氧作用时间 Exposure time (min)	HBsAg 滴度 HBsAg titer	HBsAg 减少率 Reduction rate of HBsAg(%)
0	1 : 256	…
10	1 : 256	0.0
20	1 : 128	50.0
30	1 : 64	75.0
60	1 : 64	75.0

• 空气消毒效果

在体积为 42.84m 3 的门窗密闭房间内，放置 JR-88-M 型臭氧发生器一台，进行空气消毒。经开机 60 分钟，空气中自然菌可减少 90.47% （表 4 ）。

表 4JR-88-M 臭氧发生器对空气的消毒效果

Table 4 Efficacy of ozone generator (JR-88-M) in disinfection of air

作用时间 Exposure time (min)	空气总菌量 Total bacterial count of air (cfu)	杀灭率 Killing rate (%)
30	11	73.8
45	5	88.09
60	4	90.47

注：空气总菌量指 5 个平皿采样所得菌落总数 . 消毒前对照采样，空气总菌量为 42cfu 。

Note ： The total bacterial count of air denotes the total number of colonies 5 agar plates used for air sampling. The total bscterial count of air before disinfestion wad 42 cfu .

结语

本研究结果初步表明，在 JR-90-XB 型电子保鲜盒中用臭氧进行熏蒸处理，对物体表面的细菌繁殖体与芽胞以及 HBsAg 均有一定的杀灭与破坏作用，其中尤以对金黄色葡萄球菌、大肠杆菌、伤寒杆菌与福氏痢疾杆菌的效果为好，当臭氧量为 0.028mg/L 时，作用 60 分钟可杀灭 99.9% 以上。使用 JR-88-M 型臭氧发生器在 42m 3 容积房间内进行空气消毒，作用 60 分钟，亦可使自然菌下降 90.47% 。

提要试验表明，当臭氧浓度为 0.028mg/L 作用 60 分钟，可将物体表面细菌繁殖体杀灭 99.9% 以上；臭氧浓度为 0.425mg/L 作用 60 分钟时，可将空气中自然菌杀灭 90.47% 。